一、標準簡介

  在飲用天然礦泉水檢驗方法（GB 8538）中，產氣莢膜梭菌的檢驗一直是一個必檢項目。新版《GB 8538-2022 食品安全國家標準 飲用天然礦泉水檢驗方法》已于2022.6.30發布，2022.12.30正式實施。與舊版本相比，新版標準中，在產氣莢膜梭菌檢驗方法上對計數培養基、分離方法、確證試驗和計數方法方面都有較大的變動，本文主要對這些改動進行逐一說明。

二、培養基的改變

  舊版標準《GB 8538-2016 食品安全國家標準  飲用天然礦泉水檢驗方法》中規定分離培養基采用SPS（亞硫酸鹽-多粘菌素-磺胺嘧啶瓊脂），但新標準中明確改用TSC（胰?-亞硫酸鹽-環絲氨酸瓊脂）對樣品中的產氣莢膜梭菌進行分離培養。

  有關這兩種培養基的異同及產氣莢膜梭菌在這兩種培養基上的菌落形態等，可參考文章：兩種產氣莢膜梭菌檢驗培養基的對比 點擊查看

三、分離方法的改變

  新舊版本對樣品中產氣莢膜梭菌的檢驗都涉及濾膜過濾法，但新版標準中，對于濾膜的孔徑描述更加規范（0.45μm）。

  對于帶菌濾膜的使用，舊版標準中是直接“將濾膜移至SPS瓊脂培養上"，倒置培養；而新版標準中，除了按照舊版標準的方法將濾膜轉移到TSC培養基上外，還要求“傾注5mL～10mL冷卻至50℃的TSC瓊脂均勻覆蓋濾膜表面"，在分離方法的操作上相對舊版有所改變。

  兩種分離試驗方法所取得的試驗結果如圖1所示：

圖1 產氣莢膜梭菌分離試驗結果（左：舊版方法；  右：新版方法）

四、確證試驗方法的改變

  舊版標準中，對可疑菌的確證試驗方法為：鏡檢形態、動力、硝酸鹽還原、牛奶發酵、卵磷脂分解；而新版標準中，則采用鏡檢、動力-硝酸鹽試驗、牛奶發酵試驗和乳糖-明膠試驗的方法，差異部分的試驗結果如圖2。

  有關這些驗證試驗的結果現象等詳細信息，可參考文章：產氣莢膜梭菌檢驗解析及注意事項 點擊查看

圖2 新舊版本標準中可疑菌的確證方法試驗結果比較

（左：舊標準 卵磷脂分解試驗；  右：新標準 乳糖-明膠試驗）

五、計數方法的改變

  舊版標準中規定“挑取可疑黑色菌落3個-5個"，進行后續培養確證；新版標準則要求“按比例挑取10個不同形態的可疑菌落（不足10個則全挑）"進行后續培養確證試驗。在挑取的菌數和挑菌方法上都做了更加嚴格明確的規定。并且，新版標準還明確給出了菌數計算公式和報告方式（如圖3）。

圖3 新版標準中有關結果與報告的規定

六、討論

  新版標準除了在培養基、分離方法、確證方法和計數方法方面有所改變外，在語言描述方面也更加嚴謹規范。修訂后的版本，更貼近于食品中產氣莢膜梭菌檢驗（如圖4）。

圖4 不同的食品安全國家標準中對產氣莢膜梭菌的檢驗程序

（左：GB 4789.13-2012    右：GB 8538-2022）

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